人胎盘绒膜癌细胞BEWO

一、细胞培养条件

细胞英文名称 ：BEWO

细胞中文名称 ：人胎盘绒膜癌细胞

生长特性 ：贴壁

培养体系：F12K+10%FBS 疏松贴壁，如有漂浮离心收集

传代方法：建议第一次 1:2 传代

传代情况：2 天换液

冻存条件：细胞库无血清冻存液  

备注：收集瓶中培养基，留作过渡培养。

二、细胞收到后处理

细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到 细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严 格无菌操作，培养箱静置 2-4 小时。镜下观察：未超过 80%汇合度时，可将瓶装的完全培养 液收集至离心管中，加入 6ml 完全培养基，放入 37℃、5%CO2 孵箱培养；超过 80%汇合度时， 根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，处理 完后放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶里面的完全培养基，另外 一瓶用自己配的完全培养基）

三、细胞培养步骤

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 5mL 培养基 混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 5 分钟，弃去上清液，补加 4-6mL 完全培养基后吹匀。然 后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 6cm 皿中），培养过夜。第二 天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。  

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1-2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化 1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台， 轻敲几下培养瓶后加 5ml 以上含 10%血清的完全培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在 1000RPM 条件下离心 8-10 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 按 5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 5-6 ml 培养液 的新皿中或者瓶中。

PS：若客户收到 2ml 小管细胞，收到细胞后，用 75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或 安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至 T25 培养瓶或 6cm 培养皿，加入 5ml 左右完 全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过 80%，换液继续培养， 视情况传代或者冻存。若密度超过 80%，可直接进行传代（方法同上）。