细菌的接合作用实验
一、简介
细菌的接合是指供体菌与受体菌的完整细胞经直接接触时供菌的 DNA 向受体菌单向传递给而产生基因重组的现象。大肠杆菌的接合配对是由致育因子（ F 因子）的存在所决定的。没有 F 因子的细胞作为受体，称为 F-，含有 F+ 因子的细胞作为供体。 如果 F 因子是染色体外的细胞质遗传物质，这种细胞称为 F+。如果 F 因子整合到染色体上，这种细胞称为高频重组（Hfr，high-frequency recombination） 细胞，整合在染色体上的 F 因子有时也会通过不规则杂交而脱离染色体重新成为游离状态的 F 因子，但由于 F 因子在脱离染色体时往往会附带着一段染色体片段，这个染色体片段和 F 因子构成一个整体，随 F 因子一起复制，含有这种 F 因子的细胞叫作 F'。在 Hfr×F- 杂交中，F 因子上包括先导区在内的一部分 DNA 片段结合着染色体 DNA 向受体细胞转移，F 因子的大部分 DNA 处于转移染色体的末端。 而且转移过程中随时可以发生中断，因此接合后的 F- 细胞虽然接受了某些 Hfr 基因，但一般不可能接受 F 因子而成为 F＋状态。
二、操作方法
细菌的接合作用实验
三、原理
四、材料与仪器
大肠杆菌
LB 液体培养基 链霉素硫胺素基本固体培养基平板
无菌试管 1 ml 无菌吸管 盛有 70％ 乙醇的烧杯 玻璃涂拌 振荡混合器
五、步骤
1. 分别将供体菌和受体菌接种在 2 支盛有 5 ml LB 液的试管中。37℃ 振荡培养 12 h。
2. 分别用不同的 1 ml 无菌吸管吸取 0.3 ml 供体菌培养液和 1 ml 受体菌培养液至同一无菌试管中。
受体菌是过量的，这样可以保证毎一个供休菌有相同的机会和受体菌接。
3. 用两只手掌轻轻搓转试管，使试管内供、受体菌混匀。
动作要轻柔，使供体菌和受体菌充分接触，同时避免刚接触的配对又被分开。
4. 将供、受体菌混合培养物置 37℃ 保温 30 min。
5. 3 个链霉索硫胺素固体培养基平板，冷凝后，用玻璃记号笔分别作好标记，2 个平板分别用于供体菌和受体菌作为对照，第 3 个平板用于供、受体菌混合培养物。
6. 吸取 0.1 ml 供体菌放到一个作好标记的对照平板上，用无菌的玻璃涂棒将平板上的供体菌液涂布到整个平板表面，同样吸取 0.1 ml 受体菌涂布到另一个作好标记的对照平板上。
7. 供、受体菌混合培养物保温 30 min 后，将这支试管剧烈振荡。
动作要剧烈，可用振荡混合器振荡几秒钟，使供休菌和受体菌之间的性菌毛断开，从而中止基因的遣传转移。
8. 吸取 0.1 ml 混合培养物，如上述方法涂布到作好标记的平板上。
9. 将所有的平板倒置于 37℃ 培养 48 h。
六、注意事项
七、常见问题
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