红细胞吸附法
一、简介病毒颗粒表面特有的离子对离子交换树脂和与之类似的吸附剂有亲和性,病毒吸附之后,在适当的离子条件下可使病毒颗粒脱吸,利用这一原理可以提纯病毒。常用的吸附剂
一、简介
病毒颗粒表面特有的离子对离子交换树脂和与之类似的吸附剂有亲和性,病毒吸附之后,在适当的离子条件下可使病毒颗粒脱吸,利用这一原理可以提纯病毒。常用的吸附剂有磷酸钙凝胶、氢氧化锌凝胶、红细胞、葡聚糖、活性炭等。吸附法的专一性不强,对吸附剂的亲和性因病毒不同而异。
二、操作方法
红细胞吸附法
三、原理
用于某些可与红细胞吸附的病毒的浓缩,如正粘病毒和副粘病毒,由于红细胞吸附法是特异的,故可达到浓缩并纯化的目的。
四、材料与仪器
待纯化的病毒
磷酸盐缓冲液 鸡红细胞悬液
烧杯 水浴锅
磷酸盐缓冲液 鸡红细胞悬液
烧杯 水浴锅
五、步骤
用作吸附病毒的红细胞一般选择适宜动物的红细胞,常用的是鸡红细胞。基本步骤为:
① 1%~3% 鸡红细胞与病毒悬液混合, 2℃吸附 1 h 以上或过夜;
②1 000r/min(用福尔马林处理的红细胞可用 2 000r/min) 离心 10 min, 沉淀吸附病毒的红细胞。弃上清,用冷生理盐水洗涤 2 次;
③再用 1/50 原体积(鸡红细胞与病毒悬液混合液体积)的0. 01 mol/L 磷酸缓冲盐水 (pH7. 5~7. 8), 将血细胞垂悬于 37℃水浴中保温 2~3 h;
④(1 000~2 000)r/min离心 10 min, 上清即为浓缩并部分纯化的病毒悬液。可将最后释放过程重复进行1次,以回收剩余病毒。
六、注意事项
<link />
七、常见问题
<link />