紫外线诱变法

紫外线对微生物有诱变作用，主要引起是DNA的分子结构发生改变（同链DNA的相邻嘧啶间形成共价结合的胸腺嘧啶二聚体），从而引起菌体遗传性变异。将细胞计数后的平板，分别向菌落数在5-6个左右的平板内加碘液数滴，在菌落周围将出现透明圈。分别测量透明圈直径与菌落直径并计算其比值（HC值），并与对照平板进行比较，根据结果，说明诱变效应。

 二、操作方法

紫外线诱变法

 三、原理

紫外线对微生物有诱变作用，主要引起是DNA的分子结构发生改变（同链DNA的相邻嘧啶间形成共价结合的胸腺嘧啶二聚体），从而引起菌体遗传性变异。

材料与仪器

枯草芽孢杆菌
生理盐水 培养基
血球计数板 显微镜 紫外线灯 电磁搅拌器 离心机

步骤

一、实验主要仪器设备和材料

仪器：血球计数板、显微镜、紫外线灯（15W）、电磁搅拌器、离心机。

菌种：枯草芽孢杆菌。

二、实验方法、操作步骤

1. 菌悬液的制备

（1）取培养48小时的枯草芽孢杆菌的斜面4-5支，用无菌生理盐水将菌苔洗下，并装入盛有玻璃珠的小三角烧瓶中，振荡30分钟，以打碎菌块；

（2）将上述菌液离心（3 000 r/min，离心15分钟），弃去上清液，将菌体用无菌生理盐水洗涤2-3次，最后制成菌悬液；

（3）用显微镜直接计数法计数，调整细胞浓度为每毫升108个。

2. 平板制作

将淀粉琼脂培养基溶化后，冷至55 ℃左右时倒平板，凝固后待用。

3. 紫外线处理

（1）将紫外线灯开关打开预热约20分钟。

（2）取直径6 cm无菌平皿2套，分别加入上述菌悬液5 ml，并将无菌搅拌棒放入于平皿中。

（3）将盛有菌悬液的2套平皿置于磁力搅拌器上，在距离为30 cm，功率为15 W的紫外线灯下分别搅拌照射1分钟及3分钟。

在红光下，将上述经诱变处理的菌悬液以10倍稀释法稀释成10-1-10-6（具体可按估计的存活率进行稀释）。

4. 涂平板

取10-4、10-5、10-6三个稀释度涂平板，每个稀释度涂平板3只，每只平板加稀释菌液0.1 ml，用无菌玻璃刮棒涂匀。以同样操作，取未经紫外线处理的菌稀释液涂平板作对照。

5. 培养

将上述涂匀的平板，用黑布（或黑纸）包好，置37 ℃培养48小时。注意每个平皿背面要标明处理时间和稀释度。

6. 计数

将培养48小时后的平板取出进行细菌计数，根据对照平板上菌落数，计算出每毫升菌液中的活菌数。同样计算出紫外线处理1分钟、3分钟后的存活细胞数及其致死率。

7. 观察诱变效应

将细胞计数后的平板，分别向菌落数在5-6个左右的平板内加碘液数滴，在菌落周围将出现透明圈。分别测量透明圈直径与菌落直径并计算其比值（HC值），并与对照平板进行比较，根据结果，说明诱变效应。并选取HC比值大的菌落移接到试管斜面上培养。此斜面可作复筛使用。

三、实验结果

1. 将实验结果填入下表