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微生物学

用传代细胞系平皿法测量病毒空斑形成单位

2024-05-09 微生物学 加入收藏
一、简介在制备新的病毒毒种贮液,或为蛋白质的生产和分析而进行感染时,了解毒种的滴度是非常重要的。 二、操作方法用传代细胞系平皿法测量病毒空斑形成单位 三、原理&

一、简介

在制备新的病毒毒种贮液,或为蛋白质的生产和分析而进行感染时,了解毒种的滴度是非常重要的。

 二、操作方法

用传代细胞系平皿法测量病毒空斑形成单位


 三、原理

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材料与仪器

病毒 细胞系
含 10% 小牛血清、89%水解乳蛋白一酵母浸液培养液
培养皿

步骤


(1) 将单层细胞 (2X 106/ml, 6 ml)培养在直径 60 mm 的平皿上,生长液为含 10% 小牛血清、89%水解乳蛋白一酵母浸液培养液,加双抗并调 pH 至 7.2 。


(2) 培养物置于潮湿 5% CO2 培养箱中,于37℃培养成单层,除去生长液用 Hanks 液洗一次。


(3) 每皿加入各稀释度病毒液 0. 1 ml 或 0. 2 ml, 轻轻摇匀,使之均匀分布于整个细胞层, 37℃ 5% CO培养箱中吸附 90min 后,加营养琼脂覆盖。


(4) 将双倍浓度营养覆盖层溶液与等量的 1%(已融化)的琼脂水液混合,维持在 45-50℃,每皿加入 8ml 。双倍营养覆盖层溶液配制: 6 ml 灭活小牛血清、 20 ml 10倍浓 Eagle (MEM),4 ml 3%谷氨酰胺(水配)、 5 ml 8. 8%NaHC0(水配)、 2 ml 双抗、 63 ml 无菌三蒸水、加入等量 56℃ 巳融化的 2%琼脂的水溶液并摇匀。


(5) 冷凝后翻转平皿,37℃5% CO2 培养箱培养 4~5 d 后再加入 1 ml 营养覆盖层。


(6) 继续培养,在第 5-8 d(依病毒而定),加入 0.01% 过滤中性红,检查空斑形成情况。

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注意事项

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常见问题

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