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微生物学

朊粒病的动物接种实验和细胞接种实验

2024-04-18 微生物学 加入收藏
简介动物接种实验用于判断感染因子的传染性, 致病性, 目前仍然是检查 TSEs 传染性和致病性的金标准。这种方法是将通过倍比稀释的感染因子接种易感动物, 观察实

简介

动物接种实验用于判断感染因子的传染性, 致病性, 目前仍然是检查 TSEs 传染性和致病性的金标准。这种方法是将通过倍比稀释的感染因子接种易感动物, 观察实验动物的发病情况。

原理

动物接种实验的基本原理是通常采用转基因技术将人或动物 PrP 基因转入小鼠, 使其表达宿主的 PrP 蛋白, 进而产生对 CJD 或牛海绵状脑病的易感性。

材料与仪器

器材:转基因小鼠

步骤

朊粒病的动物接种实验和细胞接种实验有以下几个实验步骤:


动物接种实验用于判断感染因子的传染性、致病性, 目前仍然是检查 TSEs 传染性和致病性的金标准。这种方法是将通过倍比稀释的感染因子接种易感动物, 观察实验动物的发病情况。可通过终点滴定法或潜伏期法来评估其感染性 (用平均潜伏期与接种剂量曲线来计算)。由于人或动物 TSEs 在野生型小鼠不能引起 PP* 沉积, 目前通常采用转基因技术将人或动物 PrP 基因转入小鼠, 使其表达宿主的 PrP 蛋白, 进而产生对 CJD 或牛海绵状脑病的易感性。将人或动物 PrP 接种此类转基因小鼠, 其囊状树突样细胞可出现 PrP 聚集,30 天后, 在小鼠脾脏中即可检测到感染性 P,P~蛋白, 为人类 TSEs 感染性的生物学检测提供了敏感、可靠的方法。目前, 针对多种已知的肮粒病, 已建立了感染动物模型。其中, 大鼠、小鼠。 仓鼠。 田鼠及转基因鼠对肮粒比较敏感, 常作为实验动物模型。动物接种具有结果可靠、说服力强的优点, 但由于受到实验费用、实验时间、种间屏障、标本病变情况﹑接种剂量、接种次数以及肮粒毒株、潜伏期等多种因素影响, 动物接种实验成功率差异较大, 且不适用于快速检测。

与动物实验相比, 细胞接种实验因实验费用低, 耗时短, 重复性高等优势, 作为快速诊断依据, 更容易被多数实验室接受。目前常用于玩粒体外增殖的细胞, 主要是一些起源于神经组织的细胞系, 如鼠嗜铬细胞瘤细胞 (PC12) 鼠神经母细胞瘤细胞 (N2a) 等。感染细胞可以采用蛋白酶抵抗试验, 动物试验来检测。但是由于尚未建立起理想的体外 Pr 繁殖体系,运今为止细胞实验仍未广泛用于肮粒病研究和诊断。


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