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PCR技术(五):常见问题分析与对策
PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性,不出现扩增条带PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,
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What causes two peaks in melting curve-Real-Time PCR
Hello everyone. My day was ruined by these two peaks~~~ It's supposed to be
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其它链扩增技术及应用范围
一、免疫PCR所谓免疫(Immune PCR)就是利用抗体与DNA特异结合来检测抗原,把抗原抗体反应与PCR联合应用而建立的一种抗原检测系统。在免疫PCR中,一
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PCR常用优化策略
PCR过程中如果没有找到最佳的扩增条件将会导致产生许多不确定的、不需要的产物,有时甚至没有目的产物;而在另一个极端,又可能没有扩增到任何产物。这时改变已知对引物
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Expand High Fidelity PCR--高保真PCR
Expand is a mixture of Taq and Pwo DNA polymerases (Boehringer). Pwo polymerase
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Designing PCR programs
1,Basic PrinciplesThe requirement of an optimal PCR reaction is to amplify a spe
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PCR的污染与对策
PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性,但令人头痛的问题是易污染,极其微量的污染即可造成假阳性的产生。污染原因(一)标本间交叉污染:标本污染主要有
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PCR技术(四):PCR污染与对策
PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性,但令人头痛的问题是易污染,极其微量的污染即可造成假阳性的产生。一、污染原因(一)标本间交叉污染:标本污染主
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关于PCR假阴性问题总结
PCR的假阳性问题深受重视,但我个人认为PCR假阴性问题相对于临床检测更为严重。其实PCR假阳性的问题是比较单纯的,一般仅涉及污染和引物的非特异性问题。而污染可
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荧光PCR/实时定量PCR技术应用简介
一、荧光PCR原理1.荧光共振能量传递 (FRET)某荧光标记基团在激发光刺激下生成某波长的发射光,当另一屏蔽基团与其距离合适时,原发射光将会被屏蔽基团所吸收,
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PCR疑难解答
当PCR结果不甚满意时,首先检查以下几方面并遵照执行:将PCR反应的试管与反应板紧贴。当酶反应混合物以70℃“热启动”开始循环时,切记在加入酶后稍微振荡一下,因
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影响PCR仪器温度控制性能的因素
一、PCR仪器之间的差别对实验结果的影响。如前所述,没有任何两台PCR仪器的温度控制是一模一样的。相对于预设的温度模块温度总是偏高或偏低,就是同一模块不同的孔之
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PCR技术(八):扩增较大片段DNA的PCR方法
一般PCR方法在扩增大片段DNA时的局限性:通常所用的PCR方法都在两个方面有局限,即目标产物精确程度和合成片段的大小。Pfu(Pyrococcus furio
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PCR--引物设计原则
PCR引物设计原则 PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列。因此,引物的优劣直接关系到PCR的特异性
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PCR常见问题的精辟总结--耶鲁大学
Troubleshooting for PCR and multiplex PCRTroubleshooting discussion is based on