标签酶消化释放标签实验

实验方案 A

1.向含有 Dynabeads 的每个试管中加入下列物质：

2.65℃ 下酶解 Ih(每 IOmin 混合 1 次)。

3.时收集上清液（含有释放的 cDNA 标签）

4.用 LoTE 扩容到 200mL。

5.等体积的 PCI 抽提，乙醇沉淀（实验方案 A，第 2 步）。

6.将冲洗和风干后的沉淀重新悬浮于 10 ul LoTE 中。

实验方案 B

1.从 PCR 试管中移去连接反应混合物并用 50ul 洗液洗涤 1 次。

2.从试管中移去冲洗液，加入 50 ul 的 1X 限制性缓冲液，然后移去限制性缓冲液。

3.向试管中加入下列物质：

4.在 65°C 下消化 lh。

5.加入 175ul 的 LoTE 然后转移到 1.5 ml 的 Eppendorf 试管中。不要丢弃，因为混合物中含有所释放的附着于接头上的 SAGE 标签。

6.如上所述，用等体积的 PCI 抽提，乙醇沉淀（实验方案 A，第 2 步)。

7.将冲洗和风干后的沉淀重新悬浮于 21.5ul 的 LoTE 中。