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RNA实验

大鼠肝rRNA的提取与分离

2024-06-20 RNA实验 加入收藏
材料与仪器大鼠肝脏 苯酚 -甲酚混合液 萘 1.5-二磺酸溶液 洗涤液 A 洗涤液 B 乙醇溶液 三异丙基萘磺酸钠 无水乙醇步骤一 材料与设备1)大鼠肝脏 :大


材料与仪器

大鼠肝脏 苯酚 -甲酚混合液 萘 1.5-二磺酸溶液 洗涤液 A 洗涤液 B 乙醇溶液 三异丙基萘磺酸钠 无水乙醇

步骤

一 材料与设备

1)大鼠肝脏 :大鼠用颈部击打法处死 ,取出肝脏 ,立即置于液氮屮 ,备用
    
2)苯酚 -甲酚混合液 :将 500 g 苯酚(须重结晶)及 70 mim-甲酚溶于 50 m l 蒸馏水中 ,并加入 0.5 g8-羟基喹啉
  
3)萘 1.5-二磺酸溶液:0 .5 g 萘 1.5 -二磺酸 溶 于 100 ml 蒸馏中
    
4)洗涤液 A:20 g 苯甲酸 钠 ,10 ml m- 甲酚 及 3 g 氯化钠溶于 100 ml 蒸馏水中
       
5)洗涤液 B: 75 ml 无水乙醇及  l g  氦化钠溶溶于 25 ml 蒸馏水中
       
6)75.% 乙醇溶液   
 
7)三异丙基萘磺酸钠  
  
8)无水乙醇


二 操作方法

1)称取鼠肝 15g 左右,加于10 倍体积的苯酚-甲酚混合溶液以及 10 倍体积的萘 5-二磺酸溶液.在下用匀浆器匀浆

2)将匀浆液取出置于烧杯中.2℃ 搅拌 20min,于50℃,6000g 离心 15min,弃沉淀,

3)上淸液加入三异丙萘磺酸钠,至最终浓度为5%,再加入 1/2 体积的苯酚-甲酚溶液,于 20℃搅拌 20min,然后以 8000g, 5℃ 离心 10 min.弃沉淀

4)在每 100ml 离心上清液屮依次加入 3g 氯化钠,2g 苯甲酸钠及 10mim-甲酌。搅拌溶解均匀后,用 8000g,5℃ 离心10min。弃上清液。

5)将沉淀物按下列顺序离心洗涤:用冷的洗涤液A 洗二次,洗涤液 B、75% 乙醇溶液各洗一次,再用无水乙醇冼二次,每次均用 25ml 最后得纯的鼠肝 rRNA. 取出 rRNA,置于装有 CaCl2 的真空干燥器中干燥。


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