RNA 的琼脂糖凝胶电泳实验

RNA 电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用 1.0% ~ 1.4% 的凝胶，不同的 RNA 条带也能分开，但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下，RNA 的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定 RNA 分子量时，一定要用变性凝胶。在需快速检测所提总 RNA 样品完整性时，配制普通的 1% 琼脂糖凝胶即可。

器材：

MOPS 缓冲液电泳仪、电泳槽、电子天平、移液器、枪头、微波炉、紫外透射检测仪、封口膜

试剂：

RNA 样品溶液琼脂糖

1×TAE 电泳缓冲液

0.5 μg/mL 溴化乙锭（EB）

10× 载样缓冲液

1. 将制胶用具用 70% 乙醇冲冼一遍，晾干备用。

2. 用 1xTAE 电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加 1xTAE 电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。

① 称取 0.5 g 琼脂糖，置干净的 100 mL 锥形瓶中，加入 40 mL 蒸馏水，微波炉内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。

② 待胶凉至 60~70 ℃，向其中加入 0.5 uL 溴化乙锭，混合均匀。

③ 灌制琼脂糖凝胶。

 
3. 在超净工作台上，用移液器吸取总 RNA 样品 4 uL 于封口膜上。在实验台上再加入 5 uL 1xTAE 电泳缓冲液及 1 uL 的 10× 载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔。

 
4. 打开电源开关，调节电压至 100 V，使 RNA 由负极向正极电泳，约 30 min 后将凝胶放入 EB 染液中染色 5 min，用清水稍微漂洗。在紫外透射检测仪上观察 RNA 电泳结果。 

RNA 琼脂糖凝胶电泳中务必去除 RNase 酶的污染，所有的试剂需用 DEPC 水配制，所用的器材也要用 DEPC 处理并灭菌，防止 RNA 被降解。