S1分析酵母基因寡核苷酸探针

　一、操作步骤

　　1. 在0.5 mL Eppendorf管中混合以下：

　　10-20 ug 酵母RNA

　　10 ul 杂交组合

　　加水，使终体积25 ul

　　40 ul 矿物油

　　在100度加热反应2分钟，转移到55度过夜（12-16小时）杂交（的准确温度将取决于寡核苷酸的长度和组成）。

　　2. 培养过夜后，旋管和1.5 ml 离心管中取出水层。添加275 ul S1组合，并培育在37度10-30分钟。取决于探头。

　　3. 6 ul 终止缓冲液+ 900 ul ETOH和执行标准的沉淀。洗净用80%ETOH粒料。重悬在6 ul 甲酰胺测序凝胶上样缓冲液含有0.1%SDS。加载样品8%测序凝胶。

　　二、功能

　　重要的控制功能有：

　　一、与没有核酸激酶探针。

　　二、含有可变数量的总RNA的反应。信号应该是线性的，如果结果是越来越多的RNA定量。

　　三、没有S1的测序凝胶的质量和大小的探头没有S1的治疗观察治疗探头负载500-1000每千次展示费用。

　　杂交组合：

　　1X S1缓冲区：

　　4 uM 硫酸锌

　　30 mM 醋酸钠pH 4.6

　　250 mM 氯化钠

　　10 ml 10X S1缓冲区

　　0.4 ml 1 M硫酸锌

　　3 ml 1 M醋酸钠

　　6.25 ml 4 M氯化钠

　　0.35 mL 水

　　S1组合：

　　27.5 ul 10X S1缓冲区

　　2.7 ug 变性鲑鱼精子DNA

　　共85个单位S1核酸酶（GIBCO / BRL）

　　H2O至最终体积为275 ul/反应

　　停止液：

　　6 ul 0.25 M EDTA

　　2 ug 的tRNA（大于10 mg/ml）