CTAB法个人总结

　总RNA提取方法的 步骤 基本相似，主要包括以下几个基本步骤：一是彻底破碎果实细胞的细胞壁；二是使核蛋白复合体中的蛋白质充分变性，实现核蛋白与核酸的分离；三是抑制内源和外源RNA酶的活性，防止RNA受污染而降解，这是能否成功获得高质量RNA的关键步骤；四是将RNA与DNA、蛋白质、多酚、多糖等物质分离；五是检测RNA的质量。

酚类物质 很容易被氧化成褐色的醌类物质，醌类物质与 RNA不可逆的结合，不仅会使RNA的活性丧失，而且在苯酚和氯仿抽提时还会使RNA丢失。

　　常见的 去除多糖的方法 有低浓度乙醇沉淀法、醋酸钾沉淀法、氯化锂沉淀法、提高缓冲液的氯化钠浓度等。

在用苯酚、苯酚：氯仿进行抽提后，加入1/15体积3 mol/L NaAc ( pH 5.2 ) 和1/5体积的无水乙醇混匀,并在冰浴上静置2 h，可促进多糖沉淀而不聚沉RNA分子；最后在弃除多糖沉淀的上清液中加入终浓度为0.3 mo1/L的NaAc和3倍体积的无水乙醇，并于-70℃下放置3 h后过夜，即可获得高质量的RNA。

　　 RNA 的沉淀方法 很多，如LiC1、异丙醇、NaAc和无水乙醇等。但是前者所得的RNA的产率比后两种方法高很多，且纯度好，没有DNA污染，不需要进行去除DNA的纯化操作，减少了RNA降解的几率；

LiC1沉淀大片段RNA的效果好，更适于进行后续的分子生物学试验；

而异丙醇沉淀获得的沉淀体积大，导致了多糖和酚类物质的共沉淀作用；

1/10体积3 mol/L的NaAc和2.5倍体积的无水乙醇所得的RNA产率较低，且和异丙醇沉淀一样存在基因组DNA的污染，后续的纯化操作提高了RNA提取的成本且增加了降解的机会。

　　 CTAB 作为离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使RNA得以游离出来，较其他几种 试剂 更能有效去除多糖和酚类等物质。

　　 β - 巯基乙醇 是一种强还原剂，可以抑制多酚的氧化和酶的水解，释放出细胞中的RNA。可以降低酶类(尤其是氧化酶类)的活性（通过打断多酚氧化酶的二硫键使之失活），还可以抑制RNA酶的活性。

PVP 是酚类化合物的螯合剂，可与多酚化合物形成复合体，使之不被氧化成醌类物质，有效地防止其与RNA的结合，提高RNA的完整性。

异硫氰酸胍 可以抑制RNA酶、防止RNA的降解。异硫氰酸胍作为强变性剂使核酸一蛋白结构发生变化，并有效解离 核蛋白 与核酸的复合体， 与β-巯基乙醇共同对RNase产生强烈的抑制作用，这样能破裂细胞并迅速释放核酸。

LiC1 选择性沉淀RNA，沉淀过夜可以有效地去除多糖，进一步除去RNA中的DNA污染。LiCl还可以沉淀剩余的酚类物质。

EDTA 螯合二价金属离子，抑制RNA酶的活性，防止RNA降解。

Tris -HCl 不仅起缓冲作用，还可防止RNA降解。

NaC1 溶液可提供缓冲反应环境。

苯酚和氯仿等有机溶剂 的提去除蛋白质、多糖和酚类等杂质。苯酚和氯仿等有机溶剂能使蛋白质变性并使抽提液分相，由于RNA溶于水相，因此经离心后即可从抽提液中去除细胞碎片和大部分蛋白质。

苯酚在低pH的情况下能促进水相中的蛋白和DNA向有机相分配，从而最大限度的除去总RNA中的蛋白和DNA。