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细胞技术

原代细胞培养注意事项有哪些?

2018-05-17 细胞技术 加入收藏
在细胞生物学领域,原代细胞培养作为解开生命奥秘的重要工具,要求实验者遵循一系列关键的注意事项以确保可靠的实验结果。本文将深入探讨如何在原代细胞培养过程中应用这些关键要点:原代培养要重点注意无菌操作,所用器械需提前高压灭菌;鼠胚原代培养时,获取组织较少,建议在冷光源体视显微镜下操作;原代细胞培养过程比较慢,培养时间最少需要一周的时间。若 2 天后可能会出现培养基变黄的现象,且无漂浮物,排除污染,属于

在细胞生物学领域,原代细胞培养作为解开生命奥秘的重要工具,要求实验者遵循一系列关键的注意事项以确保可靠的实验结果。

本文将深入探讨如何在原代细胞培养过程中应用这些关键要点:

  • 原代培养要重点注意无菌操作,所用器械需提前高压灭菌;

  • 鼠胚原代培养时,获取组织较少,建议在冷光源体视显微镜下操作;

  • 原代细胞培养过程比较慢,培养时间最少需要一周的时间。若 2 天后可能会出现培养基变黄的现象,且无漂浮物,排除污染,属于正常现象。这是因为细胞在贴壁生长过程中释放了 CO2 和其他物质导致培养液 PH 发生了改变,所以变黄;

  • 正常贴壁细胞在培养几天后,会逐渐贴满整个瓶底或者皿底,呈现出相应的形状,有的呈纤维状,有的呈多边形;

  • 细胞的第一次传代,一定要密度高一些传代原代细胞传代密度低,很难长起来。建议 1:2-1:3 传代,如果细胞数量够的条件下,P2-P3 代完成实验是最好的。如果细胞数量不够,那细胞的提取和培养比较重要,尽可能地让细胞的好状态多维持几代对实验成败来说至关重要;

  • 原代细胞不建议冻存,因为冻存很容易复活不成功。如果要冻存的话,建议在 P2 或 P3 代冻存,一些比较难复苏的细胞可以适当提高冻存液中的血清浓度;

  • 很多原代细胞的体外培养需要加入生长因子,细胞才能正常生长增殖和分化;

  • 理论上,在显微镜下可以观察到梭形的细胞说明传代培养成功。和原代培养的观察类似。但是总的来说,我们实验室的实验结果不是很好,观察到的好的细胞很少,其原因可能和原代培养时候的相近;

  • 细胞增殖分化缓慢:有些原代细胞体外培养需要加入生长因子,细胞才可正常增殖和分化,因而,实验前要根据具体细胞配置相应培养基;

  • 细胞污染:细胞污染类型分为物理污染、化学污染以及生物污染,因而原代培养要严格无菌操作,培养基专用专配不要交叉使用;

  • 消化时,细胞长时间难以消化下来:胰酶使用前,需要在 37 ℃ 水浴锅充分预热,以达到最佳酶活性。

 

在原代细胞培养的探索之旅中,无菌操作、精细观察和科学传代都扮演着至关重要的角色。祝大家的原代培养都能取得好结果。

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