原代细胞培养注意事项有哪些？

在细胞生物学领域，原代细胞培养作为解开生命奥秘的重要工具，要求实验者遵循一系列关键的注意事项以确保可靠的实验结果。

本文将深入探讨如何在原代细胞培养过程中应用这些关键要点：

• 原代培养要重点注意无菌操作，所用器械需提前高压灭菌；
  
  
• 鼠胚原代培养时，获取组织较少，建议在冷光源体视显微镜下操作；
  
  
• 原代细胞培养过程比较慢，培养时间最少需要一周的时间。若 2 天后可能会出现培养基变黄的现象，且无漂浮物，排除污染，属于正常现象。这是因为细胞在贴壁生长过程中释放了 CO2 和其他物质导致培养液 PH 发生了改变，所以变黄；
  
  
• 正常贴壁细胞在培养几天后，会逐渐贴满整个瓶底或者皿底，呈现出相应的形状，有的呈纤维状，有的呈多边形；
  
  
• 细胞的第一次传代，一定要密度高一些传代原代细胞传代密度低，很难长起来。建议 1:2-1:3 传代，如果细胞数量够的条件下，P2-P3 代完成实验是最好的。如果细胞数量不够，那细胞的提取和培养比较重要，尽可能地让细胞的好状态多维持几代对实验成败来说至关重要；
  
  
• 原代细胞不建议冻存，因为冻存很容易复活不成功。如果要冻存的话，建议在 P2 或 P3 代冻存，一些比较难复苏的细胞可以适当提高冻存液中的血清浓度；
  
  
• 很多原代细胞的体外培养需要加入生长因子，细胞才能正常生长增殖和分化；
  
  
• 理论上，在显微镜下可以观察到梭形的细胞说明传代培养成功。和原代培养的观察类似。但是总的来说，我们实验室的实验结果不是很好，观察到的好的细胞很少，其原因可能和原代培养时候的相近；
  
  
• 细胞增殖分化缓慢：有些原代细胞体外培养需要加入生长因子，细胞才可正常增殖和分化，因而，实验前要根据具体细胞配置相应培养基；
  
  
• 细胞污染：细胞污染类型分为物理污染、化学污染以及生物污染，因而原代培养要严格无菌操作，培养基专用专配不要交叉使用；
  
  
• 消化时，细胞长时间难以消化下来：胰酶使用前，需要在 37 ℃ 水浴锅充分预热，以达到最佳酶活性。

在原代细胞培养的探索之旅中，无菌操作、精细观察和科学传代都扮演着至关重要的角色。祝大家的原代培养都能取得好结果。