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细胞技术

细胞铁染色实验

2021-07-28 细胞技术 加入收藏
原理骨髓内的铁蛋白及含铁血黄素(细胞外铁)和幼稚红细胞的铁粒(细胞内铁)在盐酸环境下与亚铁氰化钾作用生成亚铁氰化铁,即普鲁士蓝反应.材料与仪器盐酸溶液 亚铁氰化钾溶液 碱性复红贮存液 复染应用液 甲醛步骤一、 实验试剂:1. 4%盐酸溶液,小心取浓盐酸(38%)40ml慢慢滴加至冷蒸馏水340ml中,边加边搅拌,此液在室温下保存数月.2. 40g/L亚铁氰化钾溶液,(在室温可保存数月)3. 碱性复

原理

骨髓内的铁蛋白及含铁血黄素(细胞外铁)和幼稚红细胞的铁粒(细胞内铁)在盐酸环境下与亚铁氰化钾作用生成亚铁氰化铁,即普鲁士蓝反应.

材料与仪器

盐酸溶液 亚铁氰化钾溶液 碱性复红贮存液 复染应用液 甲醛

步骤

一、 实验试剂:

1. 4%盐酸溶液,小心取浓盐酸(38%)40ml慢慢滴加至冷蒸馏水340ml中,边加边搅拌,此液在室温下保存数月.2. 40g/L亚铁氰化钾溶液,(在室温可保存数月)3. 碱性复红(Basic Fucbsin)贮存液:溶解碱性复红1g于无水乙酸10ml及5%的碳酸溶液90ml以上混匀.4. 复染应用液:加上述碱性复红贮存液3ml于蒸馏水100ml中,在室温保存数天.5. 37%甲醛.

二、 实验操作:

l. 将血片和骨髓片在空气中干燥,将涂片置甲醛蒸气中固定2-3min。

2. 将等量40g/L亚铁氰化钾和4%盐酸溶液混合,新鲜配制加热至约56℃将待检已固定的血涂片或骨髓片放入其中30分钟后取出用流水冲洗。

3. 置复染应用液中复染5min,依次用蒸馏水冲洗,无水乙醇冲洗,蒸馏水冲洗,最后在空气中干燥后用显微镜检查.四. 实验结果判断:铁可染色成蓝色颗粒,小珠及小块。

细胞外铁:先低倍镜观察未完全展开的骨髓小粒,再用油镜观察。

“-”    无蓝色铁粒可见

“+”    有少量铁粒或仅占少铁小珠

“2+”    有多铁粒和铁珠和少数小块

“3+” 有许多铁粒或有铁珠和少数小块.

“4+”    有极多铁粒、铁珠.并有许多小块

细胞内铁:计数100个有核红细胞,记录阳性细胞(胞浆中有蓝色颗粒者)的百分率同时注意细胞内铁颗粒数目,大小、染色深浅等,有无环形铁粒的红细胞.参考值:正常人骨髓涂片中细胞外铁呈少量至较多的铁粒,铁珠、多数人呈“+”,少数人为“2+”

幼红细胞有铁粒的阳性率为12%一14%.多数以中、晚幼细胞为主,大多数阳性的幼红细胞内含1-2个细小而无规律的铁粒,仅少数含3-5个铁粒,一般不见含5个以上铁粒的幼红细胞及环形铁粒幼红细胞.

注意事项
l. 所用器材必须清洁,事先经除铁处理,尤其是载玻片.

2. 亚铁氰化钾-盐酸反应应用液必须临时配制.

3. 作细胞外铁检查时,需用含有骨髓小粒的涂片.

4. 细胞内铁计数应以中. 晚幼红细胞为谁.


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