细胞计数实验（细胞计数实验）
原理细胞悬液制备后，需要计算悬液中所含细胞数量；一般以细胞数/mL 表示。因只有健康的细胞才有活力，接种后能够生长增殖，所以在接种关应先检查一下细胞的活力。材料与仪器器材：培养液吸管试剂：细胞悬液、台盼蓝、酒精。步骤（1） 计数板用 96% 酒精冲洗计数板后，用干净鹿皮擦净，另擦净盖片一张；把盖片覆在计数板上面，使之微微移向一侧，露出计数板台面少许，以便滴加细胞悬液。（2） 染色取吸管 1 支，伸
原理
细胞悬液制备后，需要计算悬液中所含细胞数量；一般以细胞数/mL 表示。因只有健康的细胞才有活力，接种后能够生长增殖，所以在接种关应先检查一下细胞的活力。
材料与仪器
器材：培养液吸管
试剂：细胞悬液、台盼蓝、酒精。
步骤
（1） 计数板
用 96% 酒精冲洗计数板后，用干净鹿皮擦净，另擦净盖片一张；把盖片覆在计数板上面，使之微微移向一侧，露出计数板台面少许，以便滴加细胞悬液。
（2） 染色
取吸管 1 支，伸入培养瓶中，轻轻反复吹打细胞悬液使细胞重悬均匀后，立即吸细胞悬液少许，向另一离心管中滴入细胞悬液 9 滴，再滴入台盼蓝染液 1 滴，混匀，置 2~3 分钟。
（3） 加悬液
把计数板平放在显微镜台上，立即从计数板边缘轻轻滴 1~2 滴已染色的细胞悬液，使之充满计数板和盖片间空隙中。
（4） 镜检
镜下观察可见细胞分散各处，健康细胞胞体完整，透明不着色，凡着色细胞均为不健康者。计算四角大方格内的细胞数；压中线者只计算左线和上线者，右线和下线不计算在内（即仅计算压两个边的细胞）。
（5） 接种
培养通过计数测知悬液中细胞数后，可根据实验所需细胞数量向培养容器中接种。细胞接种数量随实验目的、血清含量和细胞生物性状而定；一般接种量在 1~10 × 105 细胞/mL 范围，实验周期短，希望细胞增殖较快时，接种量可大些。用含血清量大的培养液培养胚胎来源细胞、无限细胞系和恶性细胞系时，细胞接种数量不宜太大。
注意事项
（1） 向计算板中滴细胞悬液时要干净利落，勿令液面盖过盖片，加量要适当，过多易使盖片漂移，过少易出现气泡，不理想时应重做。
（2） 镜下计数时，偶见有由两个以上组成的细胞团，应按单个细胞数计算，如细胞团数占 10% 以上，说明消化不充分；功细胞数少于 200 个 / 10 mm2 或多于 500 个 / 10 mm2 时，均说明稀释不当，需重新制备细胞悬液，再重计数。
（3） 经常使用同一细胞在相同条件下工作时，对各种情况已做到心中有数情况下，可略去某些环节，如染色检查等；计算板计算细胞数法有一定误差，用作测定细胞生长曲线时，每一样品应重复计算 4 次，取均值，较为可靠，若有电子细胞计数仪器当然更好。
（4） 体外培养细胞在悬液中呈圆形，平均直径 8~10 μm，当被接种到底物上生长时，经过延展后，则呈扁形，在底物上所占的面积按直径算可达 20~25 μm，则 1 cm2 的底物上可容纳 4~5 万个这样的细胞，这是理论上的数值，但在实际应用中，当细胞达到 80 % 汇合状态时便应做传代处理，因此细胞数量比上述理论数量少。
