多重引物PCR扩增
微卫星(microsatellite analysis)即短串联重复序列(Short tandem repeat,STR),它是由2-6bp重复单位构成的DNA序列,通常扩增获得的多态性长度片段范围在100-400bp之间。STR基因座广泛地存在于哺乳动物基因组中,以人类基因组为例,平均每15-20kb就存在1个STR座位,据此估计整个人类基因组中大约有50,000-100,000个STR位点。
由于STR位点具有高度的多态性和稳定的遗传性,因此较适合于作为遗传学DNA分子标记,目前STR分析已广泛应用于遗传制图、性状连锁性分析、亲子鉴定、疾病基因定位和物种多态性研究等诸多领域。
1985年,Mullis发明了聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR), 使DNA的体外复制变成了现实。1988年,Saiki 等将耐热DNA聚合酶引入PCR,提高了扩增反应的特异性和效率,简化了操作程序,并实现了DNA扩增的自动化,迅速的推动了PCR技术的应用和普及。
PCR能够在体外快速、特异性的扩增靶DNA,已成为当今最重要的分子生物学技术之一。法医物证应用PCR技术扩增人类基因组DNA中高度多态性位点,扩增产物经过片段长度多态性分析或序列多态性分析研究不同个体间DNA分子水平上的差异及其遗传规律,在个人识别、亲子鉴定中发挥了重要作用。
但如何实现在一个反应管中多个STR位点同时均一稳定的扩增,却一直是科研界的一个难题。
中德生物经过长时间的研究,通过对目标靶基因区域的选择,引物设计的优化,电子PCR,多重侯选引物的软件分析,反应参数的优化等方法,最终建立了稳定的多重STR-PCR扩增技术平台,并在此技术平台基础上开发了“STR银染基因分型扩增试剂盒”,“STR荧光基因分型扩增试剂盒”“宠物犬STR银染基因分型扩增试剂盒”产品。同时在此技术平台基础上正在开发食品安全领域的相关检测试剂盒,如饲料中牛、羊、猪肉组织成分检测系统。