重叠延伸PCR简介

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重叠延伸 PCR 技术 (gene splicing by overlap extension PCR, 简称 SOE PCR)

重叠延伸 PCR 技术 (gene splicing by overlap extension PCR, 简称 SOE PCR) 由于采用具有互补末端的引物 , 使 PCR 产物形成了重叠链 , 从而在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸 , 将不同来源的扩增片段重叠拼接起来 . 此技术利用 PCR 技术能够在体外进行有效的基因重组 , 而且不需要内切酶消化和连接酶处理 , 可利用这一技术很快获得其它依靠限制性内切酶消化的方法难以得到的产物 .

重叠延伸 PCR 技术成功的关键是重叠互补引物的设计 . 重叠延伸 PCR 在基因的定点突变、融合基因的构建、长片段基因的合成、基因敲除以及目的基因的扩增等方面有其广泛而独特的应用。

（1）原理及两基因的引物设计：

A 基因：

上游（ F1 ）与 开放阅读框起始密码子附近的序列相对应 ，并在5 ’末端添加酶切位点和3个保护碱基；下游（R1）与B基因终止密码子附近的序列及A基因5’末端起始密码子附近的序列互补 ，并去除 A 基因 的终止密码子TAA

B 基因：

上游（F2）与A基因终止密码子附近的序列及B基因5 ’端起始密码子附近的序列相对应 ，同样去除A基因终止密码子TAA；下游（R2）与B基因的开放阅读框终止密码子序列互补 ，并在5’末端添加酶切位点和2个保护碱基。

先分别用 F1 、 R1 ， F2 、 R2 扩增出 A 和 B 基因，然后再用 F1 和 R2 将两基因连接起来，得到融合基因。