如何快速鉴定转化子DNA

DNA连接与转化

快速细胞破碎法实验步骤

1、挑取转化平板上的单菌接种于含相应抗生素的2ml LB中,37℃振荡培养至A590值为0.6～0.8.

2、取1ml菌液至1.5ml eppendorf 管中,9000rpm离心9min,去尽上清.

3、加入70μl Cracking Gel缓冲液[1mol/L Tris –HCl(pH6.8)10ml,20%SDS 10ml, 250mmol/L EDTA 1.6ml,蔗糖27.2g, 1.2%溴酚蓝1.67ml,加双蒸水至200ml],混匀后,37℃水浴30min以上.

4、15000rpm离心15min.

5、吸取上清点样电泳,观察.

转化子DNA的酶切鉴定

转化子DNA的快速少量抽提

1) 菌液移至5ml Eppendorf 管中,9000rpm,离心9min,去上清.

2) 加溶液Ⅰ100μl,溶液Ⅱ200μl,溶液Ⅲ150μl,混匀,冰浴10min.

3) 15000rpm离心15min.

4) 吸取上清,加入异丙醇1ml混匀,置室温15～30min.

5) 15000rpm离心15min,弃上清,加入75%乙醇洗涤2次.

6) 离心弃上清,真空抽干,加入适量1×TE溶解DNA.

7) 取少量DNA电泳,观察浓度.