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微生物学

抗生素除菌法

2024-05-08 微生物学 加入收藏
一、简介细胞受各种霉菌、细菌和支原体污染后,一般都较难排除或杀灭,其中以支原体更难排除,因此从预防着眼为上。 二、操作方法抗生素除菌法三、原理细胞培养中用抗生素

一、简介

细胞受各种霉菌、细菌和支原体污染后,一般都较难排除或杀灭,其中以支原体更难排除,因此从预防着眼为上。

 二、操作方法

抗生素除菌法

三、原理

细胞培养中用抗生素是杀灭微生物的主要手段;但迄今尚无对抗支原体特效抗生素。

各种抗生素性的性质不同,联合应用比单用效果好;一般在已发生微生物污染后,再使用抗生素,常难以根除.预防性应用比污染后使用更好。有时抗生素仅对细菌有抑制作用,而无杀灭效应;反复使用抗生索还能使微生物产生抗药性,且对细胞本身也有一定影响,因此有有主张尽量不用抗生素。当然在一些有价值的细胞,仍需用抗生素挽救,在这种情况下,可采用比常用量大5~10 倍的冲击法,加药后作用24~48 小时,再换入常规培养液中,有时可能奏效。

材料与仪器

细胞
Cip BM-2 BM—1 PBS
显微镜

步骤

最近报道应用以 4-氟,2-羟基喹啉(Ciprofloxacin:Cip)、截耳素衍生物(Pleu—romutilinDeriyative:BM—Cyclin2:BM—1)和四环素衍生物(BM-2)等三种抗生京抑制支原体效果很好,这三种抗生京单用或合用都能有效地杀灭支原体,其法如下(以BM-1和MB-2 为例)

1. 抗生素制备

均可用PBS配成250×浓缩液-20 ℃备用

2. 处理

取受支原体污染的细胞,吸除培养液,加入含BM-1的1640培养液培
养3 天后,吸除培养液,再加入含BM-2 的1640培养液培养4 天,如此连续三个轮回;

3. 检测

用33258 荧光染色镜检(每个轮回末应检测一次);

4. 培养

清除支原体后的细胞,在不加上述抗生素的培养液中,再培养传代3~4 
次;

5. 镜检

如清除不彻底可再进行处理至纯净为止(一般3 个轮回即能被完全消
除)。BM-1 和BM-2 与CIP 联合应用亦可,即先用含BIP培养液培养12 天后,再按上述方法处理。

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