抗生素除菌法
一、简介细胞受各种霉菌、细菌和支原体污染后，一般都较难排除或杀灭，其中以支原体更难排除，因此从预防着眼为上。 二、操作方法抗生素除菌法三、原理细胞培养中用抗生素
一、简介
细胞受各种霉菌、细菌和支原体污染后，一般都较难排除或杀灭，其中以支原体更难排除，因此从预防着眼为上。
二、操作方法
抗生素除菌法
三、原理
细胞培养中用抗生素是杀灭微生物的主要手段；但迄今尚无对抗支原体特效抗生素。
各种抗生素性的性质不同，联合应用比单用效果好；一般在已发生微生物污染后，再使用抗生素，常难以根除．预防性应用比污染后使用更好。有时抗生素仅对细菌有抑制作用，而无杀灭效应；反复使用抗生索还能使微生物产生抗药性，且对细胞本身也有一定影响，因此有有主张尽量不用抗生素。当然在一些有价值的细胞，仍需用抗生素挽救，在这种情况下，可采用比常用量大5～10 倍的冲击法，加药后作用24～48 小时，再换入常规培养液中，有时可能奏效。
各种抗生素性的性质不同，联合应用比单用效果好；一般在已发生微生物污染后，再使用抗生素，常难以根除．预防性应用比污染后使用更好。有时抗生素仅对细菌有抑制作用，而无杀灭效应；反复使用抗生索还能使微生物产生抗药性，且对细胞本身也有一定影响，因此有有主张尽量不用抗生素。当然在一些有价值的细胞，仍需用抗生素挽救，在这种情况下，可采用比常用量大5～10 倍的冲击法，加药后作用24～48 小时，再换入常规培养液中，有时可能奏效。
材料与仪器
细胞
Cip BM-2 BM—1 PBS
显微镜
Cip BM-2 BM—1 PBS
显微镜
步骤
最近报道应用以 4-氟，2-羟基喹啉（Ciprofloxacin：Cip）、截耳素衍生物（Pleu—romutilinDeriyative：BM—Cyclin2：BM—1）和四环素衍生物（BM-2）等三种抗生京抑制支原体效果很好，这三种抗生京单用或合用都能有效地杀灭支原体，其法如下（以BM-1和MB-2 为例）
1. 抗生素制备
均可用PBS配成250×浓缩液－20 ℃备用；
2. 处理
取受支原体污染的细胞，吸除培养液，加入含BM-1的1640培养液培养3 天后，吸除培养液，再加入含BM-2 的1640培养液培养4 天，如此连续三个轮回；
3. 检测
用33258 荧光染色镜检（每个轮回末应检测一次）；
4. 培养
清除支原体后的细胞，在不加上述抗生素的培养液中，再培养传代3~4 次；
5. 镜检
如清除不彻底可再进行处理至纯净为止（一般3 个轮回即能被完全消除）。BM-1 和BM-2 与CIP 联合应用亦可，即先用含BIP培养液培养12 天后，再按上述方法处理。
1. 抗生素制备
均可用PBS配成250×浓缩液－20 ℃备用；
2. 处理
取受支原体污染的细胞，吸除培养液，加入含BM-1的1640培养液培养3 天后，吸除培养液，再加入含BM-2 的1640培养液培养4 天，如此连续三个轮回；
3. 检测
用33258 荧光染色镜检（每个轮回末应检测一次）；
4. 培养
清除支原体后的细胞，在不加上述抗生素的培养液中，再培养传代3~4 次；
5. 镜检
如清除不彻底可再进行处理至纯净为止（一般3 个轮回即能被完全消除）。BM-1 和BM-2 与CIP 联合应用亦可，即先用含BIP培养液培养12 天后，再按上述方法处理。
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