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PCR技术综述
前言一滴残留在裙子上的精液使得美国总统Bill Clinton不得不坦承他与白宫实习生有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据。这
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PCR检测的质量控制
随着兽医防疫工作重要性的逐步提高,PCR检测技术已被兽医工作者比较广泛认可,已经从实验室研究走进了临床应用阶段。如何提高PCR检测质量,已成为实验室技术人员不可
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没有P的qPCR
qPCR中的P代表什么?Polymerase,聚合酶。如果qPCR少了聚合酶,你一定觉得这是在开玩笑,巧妇难为无米之炊,没有聚合酶,定量PCR还怎么做。一直以来
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关于PCR假阴性问题的总结
PCR的假阳性问题深受重视,但PCR假阴性问题相对于临床检测更为严重。其实PCR假阳性的问题是比较单纯的,一般仅涉及污染和引物的非特异性问题。而污染可以通过严格
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引物溶解稀释方法
在实验室进行分子克隆实验时,经常需要合成大量的引物,而这些合成的引物首先要进行适当的稀释才能使用。如果不稀释就使用引物,往往造成引物的浪费和过早的活性丧失,更有
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PCR常见问题分析及对策(无扩增产物、非特异性扩增、拖尾、假阳性)
问题1:无扩增产物现象:正对照有条带,而样品则无原因:1、模板:含有抑制物,含量低2、Buffer对样品不合适3、引物设计不当或者发生降解4、反应条件:退火温度
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如何增加PCR特异性
引物设计细心地进行引物设计是PCR中最重要的一步。理想的引物对只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火。设计糟糕的引物可能会同扩增其他的非目的序列。下面的指导
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PCR实用大全
PCR引物设计的11条黄金法则一、引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因,
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反转录PCR (RT―PCR, Reversed Transcript PCR)
1 原理 RT—PCR是一种将cDNA合成与PCR技术结合分析基因表达的快速灵敏的方法,主要用于对表达信息进行检测或定量分析,还可以用来检测基因表达差异而不
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引物设计常见问题与解答(一)
1. 引物是如何合成的?目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产,无论采用什么机器合成,合成的原理都相同
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PCR实验中DNA聚合酶的选择及实验方法
一、 DNA聚合酶的选择实验室常用 DNA聚合酶有三种:TaKaRa TaqTM,TaKaRa EXTaqTM和 PyrobestTMDNA Polymeras
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PCR临床应用领域及特点
一、PCR应用特点1、操作简便目前PCR技术采用耐高温Taq DNA聚合酶,并且在有电脑控制的DNA扩增仪中进行,使操作大为简化,一次加入的酶即可满足反应全过程
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PCR引物设计及相关软件使用
主要内容:背景PCR引物设计原则常用PCR引物设计软件Primer Premier 5.0 介绍Oligo 6.22 介绍在线Primer3 介绍一、PCR聚合
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PCR技术:样品处理与注意事项
一、样品处理DNA是染色体的主要组成部分,是PCR的扩增模板。要进行PCR,研究DNA结构与功能或者用于诊断目的,首先必须从生物体内提取DNA。DNA往往以核蛋
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引物设计软件Oligo使用方法介绍
作为目前最好、最专业的引物设计软件,Oligo的功能很强,在这里我们介绍它的一些主要功能,如:普通引物对的搜索、测序引物的设计、杂交探针的设计以及评估引物对质量