λ噬菌体噬菌斑的挑取实验
原理遗传上同源的 λ 噬菌体原种是通过 "挑取” 一个完全独立的噬菌斑并将含有裂解物的琼脂/琼脂糖保存于贮存液中而获得的。获得的原种可用于制备噬菌体的
原理
遗传上同源的 λ 噬菌体原种是通过 "挑取” 一个完全独立的噬菌斑并将含有裂解物的琼脂/琼脂糖保存于贮存液中而获得的。获得的原种可用于制备噬菌体的平板裂解物或液体培养物，也可用于以后的分析。
材料与仪器
λ 噬菌体
氯仿 SM
硼硅酸盐巴斯德设管（配有橡皮球）或微量移液器 微量离心管或聚丙烯离心管
氯仿 SM
硼硅酸盐巴斯德设管（配有橡皮球）或微量移液器 微量离心管或聚丙烯离心管
步骤
一、材料
1. 缓冲液和溶液
氯仿
SM
2. 专用设备
硼硅酸盐巴斯德设管（配有橡皮球）或微量移液器
微量离心管或聚丙烯离心管（13 mm X 100 mm）
3. 载体和菌株
λ 噬菌体，在菌苔上形成完全独立的噬菌斑。
二、方法
1. 在微量离心管或聚丙烯离心管中加入 1 ml SM，再滴入一滴（约 50 μl）氯仿。
用聚丙烯离心管是因为它们抗氯仿。
2. 用一个带有橡皮球的硼硅酸盐巴斯德吸管或微量移液器，刺穿所选择的 λ 噬菌体噬菌斑直到下层的硬琼脂，轻轻一吸，将噬菌斑和下层琼脂一起吸入吸管中。
另外，也可用灭苗的 8 cm 长的木质签（又称挑苗签或棉签）或牙签轻轻接触所要挑选的噬菌斑中央的顶层琼脂/琼脂糖的表面来挑取噬苗斑，立即将签放入 SM/氯仿中，涡旋振荡使含噬菌体的琼脂/琼脂糖脱落。
3. 从硼硅酸盐巴斯德吸管中洗下琼脂块，置于含 SM/氯仿（在步骤 1 中制备）的试管中，将试管盖上帽于室温放置 1~2 h，使噬菌体颗粒从琼脂块中脱落下来。为帮助洗脱，可将试管放于摇床上轻轻转动。最后，将噬菌体悬浮液置 4℃ 保存。
1. 缓冲液和溶液
氯仿
SM
2. 专用设备
硼硅酸盐巴斯德设管（配有橡皮球）或微量移液器
微量离心管或聚丙烯离心管（13 mm X 100 mm）
3. 载体和菌株
λ 噬菌体，在菌苔上形成完全独立的噬菌斑。
二、方法
1. 在微量离心管或聚丙烯离心管中加入 1 ml SM，再滴入一滴（约 50 μl）氯仿。
用聚丙烯离心管是因为它们抗氯仿。
2. 用一个带有橡皮球的硼硅酸盐巴斯德吸管或微量移液器，刺穿所选择的 λ 噬菌体噬菌斑直到下层的硬琼脂，轻轻一吸，将噬菌斑和下层琼脂一起吸入吸管中。
另外，也可用灭苗的 8 cm 长的木质签（又称挑苗签或棉签）或牙签轻轻接触所要挑选的噬菌斑中央的顶层琼脂/琼脂糖的表面来挑取噬苗斑，立即将签放入 SM/氯仿中，涡旋振荡使含噬菌体的琼脂/琼脂糖脱落。
3. 从硼硅酸盐巴斯德吸管中洗下琼脂块，置于含 SM/氯仿（在步骤 1 中制备）的试管中，将试管盖上帽于室温放置 1~2 h，使噬菌体颗粒从琼脂块中脱落下来。为帮助洗脱，可将试管放于摇床上轻轻转动。最后，将噬菌体悬浮液置 4℃ 保存。
相关文章
