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RNA实验

酵母总RNA的制备

2024-06-14 RNA实验 加入收藏
材料与仪器AE 缓冲液。 苯酚 10%SDS 酚 氯仿 无水乙醇 乙醇. 3mol L 乙酸钠 无 RNase 的水髙速离心机步骤一 材料与设备1)AE 缓冲液


材料与仪器

AE 缓冲液。 苯酚 10%SDS 酚 氯仿 无水乙醇 乙醇. 3mol L 乙酸钠 无 RNase 的水
髙速离心机

步骤

一 材料与设备

1)AE 缓冲液:50 mmol/L 乙酸钠 (PH5.3),lOmmol/LEDTA。

2) 苯酚 (用 AE 缓冲液预先平衡)。

3)10%SDS

4) 酚:氯仿(1:1)。

5) 氯仿

6) 无水乙醇及 80% 乙醇.

7)3mol/L 乙酸钠

8) 无 RNase 的水

9) 髙速离心机。


二 操作方法

1) 离心收集 l0 ml 酵母细胞培养物,用 40ulAE 缓冲液重悬。转移到 1.5 ml 离心管中。

2) 加入 40ul10%SDS,混匀,再加入等体积 (440u1) 苯酚,涡旋混匀。

3)65°C 温育 4mim, 干冰/乙醇浴迅速冷却直至出现苯酚结晶,最大转速离心 2 min,. 上清转移到一新管中。

4)加入等体积酚:氯仿抽提,离心 5 min, 上清转移到新管中,加入 0.1 倍体积的 3mol/L 乙酸钠(pH5.3) 及倍体积无水乙醇,一 20℃ 沉淀 30 min。

5) 以 12000 g,于 4℃ 离心 lOmin, 冉以 lml80% 乙醇漂洗沉淀。干燥后,RNA 溶于 20ul 无 RNase 的水中, 于-70℃ 保存。

注意事项

用 PH 8. 0 的 Tris-Cl 平衡的苯酚代替 AE 平衡酚也可取得良好的效果。


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