最新血液RNA提取
1 、血液收集:最好用肝素抗凝,因为 EDTA 可能会对后续的 pcr 有影响,因为 EDTA 会螯合 pcr 反应中的 Mg2+ ,也可以根据实验的具体要求看
1 、血液收集:最好用肝素抗凝,因为 EDTA 可能会对后续的 pcr 有影响,因为 EDTA 会螯合 pcr 反应中的 Mg2+ ,也可以根据实验的具体要求看选择怎么样的抗凝。 2 、白细胞的分离:一般选择 1.5ML 新鲜的血液,或选取冷冻的 5ML 的血液(冷冻血液的保存:先液氮速冻,再置于 -80 °保存),或隔天的 5ML 的血液,就可以分离到比较多的白细胞了。可以选择溶红素( BD 公司的)或红细胞裂解液按一定的比例( 1 : 3 或 1 : 5 )分离白细胞,一般在 3500 转离心 6 分钟即可,效果不好的话,可以重新裂解一次。分离得到的白细胞,立刻用质量好的 TRIZOL 裂解白细胞,如果不能马上提取的话,可以置于 -20 或 -80 °保存,过后抽提。 3 、 RNA 抽提:选择一般的组织或细胞的 RNA 抽提试剂盒即可。 本方法简单,省钱,经过大量的实验表明是可行的,并且本人用进口的血液 RNA 抽提试剂盒都不能跟上述方法比!!! |