慢病毒载体概况及发展历程

1、慢病毒载体概况

慢病毒是逆转录病毒科亚科之一，分为两类：灵长类和非灵长类慢病毒。灵长类慢病毒包括HIV-1、HIV-2、猴免疫缺陷病毒( SIV)，非灵长类慢病毒包括猫免疫缺陷病毒(FIV)、牛免疫缺陷病毒(BIV)、马免疫缺陷病毒(EIAV)等。

多项研究表明慢病毒载体具有可感染非分裂期细胞、可长期表达、而且宿主细胞免疫反应小、细胞毒性小等优点。因其自身结构特点，可包装8～lOkb，适用于多基因表达系统，而且基因组包含较少的核苷酸，抵抗基因沉默能力较强，宿主体内更以表达，而且在整合时整个转录区域都可以整合，降低了慢病毒对启动子的激活机会。

2、慢病毒载体历史及构建

目前，使用不同种属来源的慢病毒载体：

第一代慢病毒载体系统是以Naldini及Kafri构建的三质粒系统为代表，该系统由包装质粒、包膜质粒及载体质粒3种质粒组成。载体质粒携带了5’端LTR和全部5’端非翻译区域、以及rev应答元件( RRE)及3’端LTR。

包装质粒由HIV-1莳病毒基因组做简单修改得到，其5’端LTR由异源病毒启动子／增强子元件取代。包膜质粒的改进（引入了VSV-G基因）降低了HIV-1恢复成野生型病毒的可能，扩大了所能感染细胞的类型，同时VSV包膜提高了HIV载体稳定性，从而使HIV-1载体滴度由105TU/mL转录单位达到了lOsTU/mL。

第二代慢病毒载体系统又去除了包装质粒的4个辅助基因，进一步降低了野生型病毒的可能性，最大的优点是对病毒滴度影响不大。

自身失活型( SIN)慢病毒载体：3’端LTR的U3区启动子发生失活突变后，将在逆转录过程中转移至5'LTR。如果这样的载体整合入靶细胞，将不会产生完整长度的载体RNA。自身失活型载体技术最先应用于莫洛尼氏小鼠白血病病毒(MoMLV)载体和鸟类的脾坏死病毒(SNV)载体。