PCR法检测乙肝病毒

　PCR方法操作简便，灵敏度高，可检测出少至0.1pg的目的DNA。目前已广泛应用于多种病原微生物的检测。 乙肝病毒（HBV）感染引起的乙型肝炎，在我国发病率很高，而且HBV与肝硬化、原发性肝癌关系密切，因此，HBV的诊断极为重要。PCR检测HBV-DNA敏感性明显高于传统的血清学方法，且能显示HBV在体内复制情况，直接反映患者血液的感染性，并对模棱两可的或与临床表现不符的血清学结果，PCR技术有助于明确诊断。 　 【材料】 待检血清、HBV-PCR反应液 20管（20μl/管）、HBV-DNA裂解液、阳性模板、溴化乙锭、PCR扩增仪、电泳仪、紫外线分析仪。 　　【方法】 1、标本处理： 取混匀的血清20μl加20μl裂解液，搅匀后100℃沸水浴10分钟， 最后15000rpm/分钟离心3分钟，取4μl上清待检。 2、加样及PCR： 　　取反应液一管（使用前稍加离心），加4μl待检上清或阳性对照于底层反应液中，混匀后高速离心片刻，然后置94℃预变性2分钟，再按94℃/30 秒、55℃/30秒、72℃/60秒扩增35个循环。 　　3、电泳与结果判断： 　　取15μl反应液，经2%琼脂糖凝胶电泳（5V/cm）30分钟后，在紫外灯下观察结果，若410bp处出现橙黄色带，则HBV为阳性。 　　【注意事项】 1、反应管中加好所有 试剂 后，应立即上机扩增，以免形成过多的二聚体。 2、阳性模板可用阳性 血清 代替，处理方法同上。