病毒的血清学诊断

血清学方法可以用来确定呼吸道病毒感染，但因这需要收集至少相隔两周的双份血清来评价（急性期和恢复期），故很少用于临床诊断，目前该方法常用于流行病学调查和临床研究。血清抗体水平增加4倍或更多，被认为是感染的证据，有多种方法可以使用。

器材：
①一次性无菌手套
②标本采集管
③棉签拭子
④PCR仪

试剂：
①材料：待采标本
②PBS缓冲液

病毒血清学诊断根据病毒种类不同，其基本步骤可分为如下几种：

1．补体结合实验 补体结合试验（CF）是相对容易实施的检测法，已能检测流感病毒，呼吸道合胞病毒，副流感病毒，腺病毒和冠状病毒229E和OC43，这些检测法以属或型特异性抗原表位为靶目标。

由于异型反应和中和反应所测得的缺乏血清反应相关性，CF试验尚用于鼻病毒和肠道病毒的检测。针对新近发现的病毒如人偏肺病毒和新的冠状病毒的CF检测法还有待进一步研究。

2．ELISA操作相对容易，可重复性好，可用于测定血清或者呼吸道分泌物中的抗体。使用的抗原可以是病毒颗粒，或者病毒的蛋白，因此检测的适应范围广，即可是属特异性，也可是型特异性，方法经过改良后可用于感染或接种疫苗后特定免疫球蛋白（IgG抗体，IgA抗体，IgM抗体）的测定。

3．血凝素抑制试验 可对有血凝素活性的病毒进行检测，包括流感病毒、副流感病毒、冠状病毒OC43、一些腺病毒、鼻病毒和肠道病毒。不是所有的病毒都会使同一动物的红细胞凝集，所以实验中红细胞的选择是基于病毒血凝素的凝集范围决定的。

血凝素抑制试验最常用于流感病毒和副流感病毒检测，通常使用鸡或火鸡红细胞来检测流感病毒血凝素抗体，需注意的是测定H1N5的抗体时推荐使用马血细胞。

豚鼠或人红细胞可用于副流感病毒血凝抑制试验。进行血凝抑制实验前，用受体破坏酶预处理待检人血清，以除去人血清中的非特异性抑制因子，避免出现血凝素抑制试验的假阳性。

4．中和试验是基于血清中和抗体能阻止病毒复制的原理设计的实验，适用于可培养病毒中和抗体的检测。中和抗体的量可通过系列稀释的血清与已知定量病毒作用后，通过细胞病变的减少，或者培养物血凝效价的降低，或者空斑形成单位减少来显示。