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提高RT-PCR特异性的方法总结
第一链cDNA合成的起始可以使用三种不同的方法,各种方法的相对特异性影响了所合成cDNA的量和种类。引物种类对特异性的影响随机引物法是三种方法中特异性最低的。引
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提高RT-PCR的灵敏度与产物长度
材料和方法1. Eppendorf cMaster RTplusPCR系统2. Eppendorf Perfect RNA Eukaryotic试剂盒3. 所有
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增加RT-PCR特异性的办法
第一链 cDNA合成的起始可以使用三种不同的方法,各种方法的相对特异性影响了所合成cDNA的量和种类。随机引物法是三种方法中特异性最低的。引物在整个转录本的多个
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RT-PCR反应液调制及反应设置
一、按下列组成在PCR 反应管中调制反应液ReagentQuantity,for 50µl of reaction mixture10One Step RNA
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RT-PCR实验方法总结
RT-PCR实验有三步:抽提RNA,RT,PCR。要求:1.做RT前必需测RNA浓度,逆转录体系对RNA量还是有一些要求,常用500ng或1ug。2. RT按要
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RT-PCR引物的选择
随机引物适用于长的或具有发卡结构的RNA.适用于rRNA、mRNA、tRNA 等所有RNA的反转录反应。主要用于单一模板的RT-PCR反应。Oligo dT适用
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RT-PCR实验方法简介
RT-PCR定义:是指对组织或细胞的总RNA进行抽提,把RNA反转录为cDNA,然后设计目的基因引物进行PCR,琼脂糖电泳并数码拍照,分析电泳条带灰度值,判断目
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最新的GoTaq®两步法RT-qPCR系统
凭借新的GoTaq®两步法RT-qPCR系统,Promega提高了RNA定量的灵敏度 Madison, WI USA. (2010年8月10日) Promega
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RT-PCR在基因表达(gene expression)检测中的应用
基因表达的检测方法基因表达的检测有几种方法。经典的方法(仍然重要)是根据在细胞或生物体中 所观察到的生物化学或表型的变化来决定某一特定基因是否表达。随着大分子分
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实时荧光定量PCR
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)可对特定核苷酸片断进行指数级的扩增。在扩增反应结束之后,我们可以通过凝胶电泳的方法对
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逆转录-聚合酶链反应实验方法
逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取组织或细胞中
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RNA 提取策略及RT-PCR技术
第一部分RNA 提取策略1、RNA降解的原因内源性RNAase是造成RNA降解的最重要原因,因为人体细胞自身就是几十分钟(20min?)mRNA被降解一轮,所以
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RT-PCR实验步骤
实验材料:水稻叶片的 RNA 。实验原理:目前 PCR 技术只能扩增 DNA 模板,对 RNA 模板不能直接扩增。mRNA反转录生成的 cDNA 可作为 PCR
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逆转录(RT)实验步骤
一、准备工作1、实验器具与材料:(1)移液枪:200ul、10ul(2)吸头:200ul、20ul(3)EP管1。5ml、100ul(4)水浴箱2、实验器具的处
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RT-PCR步骤
总RNA提取1. 取200mg组织,放到1.5ml EP管中,加入1ml Trizol剪碎。2. 震荡30s。3. 加0.2ml氯仿,剧烈摇动30s,室温3mi