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RNA实验

总 RNA 提取实验(氯化锂提取法)

2024-06-14 RNA实验 加入收藏
原理用高浓度尿素变性蛋白并抑制RNA 酶,用氯化锂选择沉淀RNA ,其特别适合于从大量样品中提取少量组织RNA ,具有快速简洁的长处,但也存在少量DNA的污染及


原理

用高浓度尿素变性蛋白并抑制RNA 酶,用氯化锂选择沉淀RNA ,其特别适合于从大量样品中提取少量组织RNA ,具有快速简洁的长处,但也存在少量DNA的污染及RNA 得率不高,小RNA 片断丢失的缺陷。

材料与仪器

微生物 动物细胞 植物组织
氯化锂 尿素 Tris-HCL EDTA SDS
恒温水浴 冷冻高速离心机 紫外分光光度计 取液器 电泳仪 电泳槽

步骤

一、组织或细胞匀浆

1.  对于大量组织或细胞,则每克组织或细胞加入5~10 ml 氯化锂-尿素溶液,匀浆器高速匀浆2分钟。

2.  对于少量细胞(107个细胞/ml),则每克组织或细胞加入0.5 ml 氯化锂-尿素溶液手工匀浆,并转移至Eppendof管中。
 
二、纯化

1.  匀桨液在0~4℃放置4小时后,12 000 g 离心30分钟。
 
2.  取沉淀,加入原匀桨液1/2体积的氯化锂-尿素溶液,重复步骤1。
 
3.  沉淀用原匀浆液1/2体积的氯化锂-尿素溶液复溶后,加入等体积酚/氯仿/异戊醇在室温放置15~30分钟并不时摇动混匀,4 000 g 离心5分钟。
 
4.  取上层水相,加1/10倍体积的3 M 乙酸钠(pH5.2)及2倍体积的乙醇,-20℃放置1小时,5 000 g 离心。
 
5.  70%乙醇洗沉淀一次,真空干燥。
 
6.  RNA 溶解液溶解沉淀,得RNA 。

三、保存

分装,于-70℃保存。


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