总 RNA 提取实验(CsCl法)
材料与仪器RNAPBS 异硫氰酸胍 CsCl DEPC 无水乙醇注射器 电泳仪 离心机 培养箱步骤一、 用于单层培养细胞 1. 室温下用PBS冼涤细胞，每平皿
材料与仪器
RNA
PBS 异硫氰酸胍 CsCl DEPC 无水乙醇
注射器 电泳仪 离心机 培养箱
PBS 异硫氰酸胍 CsCl DEPC 无水乙醇
注射器 电泳仪 离心机 培养箱
步骤
一、 用于单层培养细胞
1. 室温下用PBS冼涤细胞，每平皿用5 ml，洗2次。
2. 在不超过108细胞中加入异硫氰酸胍溶液，并使之遍布整个平皿。
3. 用橡皮细胞刮子擦刮平皿，回收粘稠的细胞裂解液。
4. 用装有20-G针头的皮下注射器往返抽吸裂解物，并合并在一起。
2. 在不超过108细胞中加入异硫氰酸胍溶液，并使之遍布整个平皿。
3. 用橡皮细胞刮子擦刮平皿，回收粘稠的细胞裂解液。
4. 用装有20-G针头的皮下注射器往返抽吸裂解物，并合并在一起。
二、用于悬浮培养细胞
1. 用JS-4，2转子离心回收≤108细胞，重悬于相当于1/2原有体积的PBS，并再次离心回收细胞。
2. 往离心管中加入3.5 ml 异硫氰酸胍溶液。
3. 用装有20-G针头的6注射器将粘稠的细胞裂解液注返抽吸4次，并将其移至一个干净的试管中。
4. 在经硅化并高压过的13 mmx51 mm 的异质同晶聚合物超离心管中，加入1. 5 ml 5.7mol/l CsCl。
5. 并在此垫层上加入3.5 ml 细胞裂解液，界面应清晰。
5. 并在此垫层上加入3.5 ml 细胞裂解液，界面应清晰。
6. 于18℃用Beckman SW-55转子150 000 g 离心12~20 h（缓慢加速和减速）。
7. 用巴斯德吸管的管尖在液面上吸取上清，管子随液面的下降而下降。
8. 当吸至仅剩约100 ul 时，小心倒置管子，倒出剩余液体。
7. 用巴斯德吸管的管尖在液面上吸取上清，管子随液面的下降而下降。
8. 当吸至仅剩约100 ul 时，小心倒置管子，倒出剩余液体。
9. 晾干沉淀约5~10 min，然后以360 ul TES溶液重溶沉淀，反复地以吸管上下抽吸。
10. 如此在室温进行5~10 min，转移溶液于另一干净的微量离心管。
11. 加入40 ul 3mol/l pH5.2的乙酸钠缓冲液和1 ml 无水乙醇。
12. 在干冰/乙醇中沉淀30分钟，离心10~15 min，用360 ul 水重溶沉淀并重复沉淀过程。
13. 让沉淀晾干10 min，溶解于200 ul 水，取10 μl 稀释至1 ml 测A260和A280。
14. 以水溶液或乙醇沉淀的形式在-70℃贮存RNA。
10. 如此在室温进行5~10 min，转移溶液于另一干净的微量离心管。
11. 加入40 ul 3mol/l pH5.2的乙酸钠缓冲液和1 ml 无水乙醇。
12. 在干冰/乙醇中沉淀30分钟，离心10~15 min，用360 ul 水重溶沉淀并重复沉淀过程。
13. 让沉淀晾干10 min，溶解于200 ul 水，取10 μl 稀释至1 ml 测A260和A280。
14. 以水溶液或乙醇沉淀的形式在-70℃贮存RNA。
注意事项
1. 1~5步的操作均在室温进行。
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