呼吸道感染病毒标本的采集与处理

针对呼吸道病毒感染的标本有鼻／咽拭子（nasopharyngeal swabs，NP）、痰（sputum）、鼻咽抽吸物（nasopharyngea aspirates，NPAs）、支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage，BAL）以及含漱液等。

器材：
①一次性无菌手套
②采集管

试剂：
①材料：采集标本
②标本缓冲液

呼吸道感染病毒标本的采集与处理根据样本类型，其基本过程可分为如下几种：

一、呼吸道感染病毒标本的采集

1．鼻拭子（nasal swab）的采集方法是：患者坐下，头后倾，从无菌包装中取出拭子，轻柔地以平行于上腭的方向插入鼻孔，在鼻腔内侧黏膜上转动3～5次，旋转拭子慢慢退出鼻孔，双侧鼻孔用同一根拭子进行采集后将拭子头插入病毒传送管中送检。

2．咽拭子的采集方法是：患者坐下，头后倾，张大嘴，由采样者用压舌板固定舌头，拭子越过舌根到咽后壁及扁桃体隐窝、侧壁等处，反复擦拭3～5次（避免触及舌、口腔黏膜和唾液），取出后将拭子头插入病毒传送管中（一般4～5 ml采样液），将拭子头部与管壁接触几下，尽量使标本保存在采样液中，用手捏拭子尾部折断弃去，最后确保采样管盖子旋紧，并核对标本信息送检。

拭子好采用病毒传送管运送。含漱液的采集方法是用10 ml洗液漱口，漱口时让患者头部微后仰，发“ao”声，让洗液在咽部转动，然后，用平皿或烧杯收集洗液。鼻洗液：患者取坐姿，头微后仰，用移液管将1～1.5 ml洗液注入一侧鼻孔，嘱患者同时发“K”音以关闭咽腔。然后让患者低头使洗液流出，用平皿或烧杯收集洗液。重复此过程数次。洗两侧鼻孔最多可用10～15 ml洗液。

3．痰液采集方法有几种，自然咳痰法最常用，晨痰最佳。患者清晨起床后，用清水或冷开水反复漱口，用力深咳，直接吐入无菌采集容器中，标本量应≥1 ml，立即送检。痰量少、无痰或咳痰困难者，可采用诱导咳痰法，于超声雾化器雾化杯中加入4％ NaCl溶液40 ml，患者雾化吸入高渗盐溶液15～25分钟，嘱患者漱口，用力咳出深部痰，收集入无菌采集容器送检。

有条件还可采用支气管镜采集，用常规支气管镜在有痰和病变部位用导管吸引直接取得标本，置于无菌采集容器送检。对小儿，可用弯压舌板向后压舌，将拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳嗽时，可喷出肺部或气管分泌物，将粘在拭子上的分泌物置于无菌采集容器。幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰取样。

4．鼻咽抽吸物 用商品化的黏液抽吸器的导管在鼻尖到外耳道中间的位置连接，不停地转动导管，采用负压100 mmHg持续15秒的间歇性抽吸后慢慢退出。另一鼻孔重复上述操作。粘在导管腔内的分泌物用无菌采集容器收集，另一管通过1 ml病毒运输液冲洗转移到黏液收集管中。

5．支气管肺泡灌洗液 属于下呼吸道感染标本，患者经局部麻醉后将纤维支气管镜插入左肺舌段或右肺中叶支气管，将纤维支气管镜上端契入支气管分支开口，经气管活检孔缓缓注入少量37 ℃灭菌生理盐水，每次30～50 ml，总量100～250 ml。每次注液后以低负压吸引器吸出，负压不可过大、过猛。操作过程必须严格执行无菌操作，回收的灌洗液分别收集于用硅油处理过的容器，容器周围可用冰块包裹，及时送检。

6．血液 通常采血部位为肘静脉，将止血带扎在静脉取血部位的上方，采血部位的局部皮肤用消毒液由采血部位向外周严格消毒，消毒后不可接触采血部位，待消毒液挥发后，采用商品化的一次性注射器或真空采血管采血5～8 ml。

7．胸腔穿刺液 由临床医师进行常规穿刺术抽取5～10 ml穿刺液置于无菌采集容器中，立即送检或置于4 ℃冰箱保存。

二、呼吸道感染病毒标本的处理

呼吸道标本和胸腔穿刺液用于病毒检测前需要进行分装，如标本黏液成分较重，可进行液化处理，以提高检出效率。标本上清液可直接接种或低温保存。

用于病毒培养的标本，如怀疑有细菌污染时，可在离心的基础上，用0.2 μm滤器将标本过滤后使用，或者在标本中加入青霉素和链霉素等抗生素。血液标本应2000～2500 r／min离心5分钟收集血清，血清可在4 ℃存放1周，长期保存置-20 ℃。

1．采样时间 一般在发病初期或急性期采样，较易检出病毒。咽、鼻拭子或含漱液在发病的最初3天采集。检测病毒特异性IgG抗体需要采取急性期与恢复期双份血清，第一份尽可能在发病后立即采取，最迟不超过发病后7天；第二份恢复期血样应在发病后2～4周采取，单份血清一般不能用作诊断。尸检标本在患者死亡后尽早随尸检采集。

2．采集要求 在采样拭子的选择上，最好用植绒拭子（flocked swabs），采样头由尼龙绒毛和粘胶两部分组成，对人体和微生物无害，能最大限度地增加标本的采集释放量，其上皮细胞的采集数量比常规棉拭子高出2～3倍。

在采样方法选择上，年龄较大的儿童和成年人常采集鼻咽拭子，而婴幼儿通常采集鼻咽抽吸物。在咽拭子采样前，应评估采样对象咽喉部有无分泌物，能否采集到合格的标本以及是否愿意配合采样。采样前应仔细检查采样管是否密封，有无破损及采样液是否发生变色或混有杂质，并注意采样管的标识。死亡病例，采集的病变组织应保存于50％的甘油缓冲盐水中。

3．标本的包装与运送 采集的标本须放在大小合适的带螺旋盖且内有橡胶圈的塑料管里，拧紧，将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封，每袋装一份标本。

直接在塑料管上用油性记号笔写明标本的种类、采样时间、编号、患者姓名，同时将标本有关信息填入送检登记表，连同塑料管用另一塑料袋密封送检。如果标本需运至异地检验，则应将装标本管的密封袋放入专用运输箱内，放入冰排，用具吸水和缓冲能力的材料填充，专人运送至检测单位。

如果标本不能立即送检，可在4 ℃短期保存几天，如需要保存更长时间才能检测，标本应尽快在-70 ℃或以下保存，对大多数呼吸道感染病毒，如果24小时内不能检测，建议放-70 ℃或以下保存。呼吸道合胞病毒冻存后，感染力会大大下降，其标本采集后应立即接种细胞。